【化工仪器网 时事热点】2020年12月初，法国农业部发表声明中，法国国家卫生安全署(ANSES)参考实验室确认，该国西南部一家养殖场有6000只鸭子感染H5N8型病毒，并发现大量鸭子迅速死亡。2021年1月6日，法国农业部后续通报，该国朗德省(Landes)养禽场发生22起家禽H5N8亚型高致病性禽流感疫情，5121只家鸭和珍珠鸡感染，274只死亡，2.5万只被扑杀。
 

　　近几年，H5N8型病毒已先后在欧洲以及日本、韩国、中国台湾等多个国家和地区均发生过规模化爆发，引发了多方关切。
 

　　为保护我国畜牧业安全，加强高致病性禽流感的诊断技术，确保第一时间发现疫情，做到可防可控。近日，国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会正式发布《高致病性禽流感诊断技术》(G/B T 18936—2020)国家标准，该标准由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中华人民共和国北京海关、中国动物卫生与流行病学中心等单位负责起草。
 

　　标准规定了高致病性禽流感临床诊断，样品采集、保存与运输，病毒分离与鉴定，血凝和血凝抑制剂试验，禽流感病毒RT-PCR试验和禽流感病毒荧光RT-PCR试验的技术要求。
 

　　本标准将代替《高致病性禽流感诊断技术》(G/B T 18936—2003)标准，与旧标准相比，新标准在技术方面出现几点变化：一是增加了禽流感病毒RT-PCR试验； 二是增加了禽流感病毒实时荧光RT-PCR试验；三是删除了琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验；四是删除了间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。
 

 

　　此次新增的禽流感病毒RT-PCR试验和荧光RT-PCR试验主要适用于检测禽组织、分泌物、排泄物等物质中的禽流感病毒核酸。
 

　　目前 PCR 技术只能扩增 DNA 模板，对 RNA 模板不能直接扩增。 mRNA反转录生成的 cDNA 可作为 PCR 的模板进行扩增，这种在 mRNA 反转录后进行的 PCR 扩增称为 RT-PCR 。 其特点是杂交灵敏度高，对 RNA 的质量要求较低，操作简便。目前该技术广泛应用于分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统等科研中。
 

　　而实时荧光RT-PCR(荧光定量聚合酶链式反应)指的是在PCR进行的同时，对其过程进行实时监测的能力，数据可在PCR扩增过程中进行收集，而非在PCR结束之后，反应以循环中首次检测到目标扩增的时间点为特征，而非在一定循环数后目标分子累计的扩增量。目标核酸的起始拷贝数越高，则会越快观察到荧光的显著增加。相反，终点法检测(也称 “读板检测”)测量的是PCR循环结束时累计的PCR产物量。
 

　　在仪器设备方面，新标准对适用仪器PCR扩增仪及配套反应管、高速台式冷冻离心机、生物安全柜、微量移液、荧光PCR仪等的配备要求及操作规范做了清晰的介绍。
 

　　标准是科学、技术及实验经验的总结。每一项标准的出台都是因时因需而生，标准的制定为某个领域在一定范围内达到最佳秩序起到良好的规范作用。时隔18年，《高致病性禽流感诊断技术》(G/B T 18936—2020)国家标准的发布，对于高致病禽流感病毒的检测工作具有重要的技术指导意义。